Субпопуляционный состав опухоль-инфильтрирующих лимфоцитов при люминальном раке молочной железы и его влияние на эффективность неоадъювантной химио-терапии

Е.И. Коваленко, к.м.н., с.н.с. отделения химиотерапии № 1¹

Е.В. Артамонова, д.м.н., проф., зав. отделением химиотерапии № 1¹, кафедра онкологии²

Т.Н. Заботина, д.б.н., зав. отделом клинико-лабораторной диагностики¹

З.Г. Кадагидзе, д.м.н., проф., в.н.с. лаборатории клинической иммунологии¹

С.Г. Багрова, к.м.н., н.с. отделения химиотерапии № 1¹

М.В. Киселевский, д.м.н., проф., зав. лабораторией клеточочного иммунитета¹

И.К. Воротников, д.м.н., проф., в.н.с. хирургического отделения № 15¹

Д.А. Денчик, к.м.н., н.с. хирургического отделения № 15¹

В.И. Кузьмина, cт. лаборант кафедры онкологии²

Е.Н. Захарова, к.м.н., н.с.²

Э.К. Шоуа, врач-онколог лаборатории клинической иммунологии¹

Я.А. Жуликов, ординатор отделения химиотерапии № 1¹

М.В. Хорошилов, ординатор отделения химиотерапии № 1¹

А.В. Егорова, к.м.н., доцент кафедры онкологии и лучевой терапии²

В.А. Хайленко, д.м.н., проф., акад. РАЕН, заслуженный врач России, зав. кафедрой онкологии²

¹ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н. Н. Блохина» Минздрава России, г. Москва

²ФДПО ФГАОУ ВО «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н. И. Пирогова» Минздрава России, г. Москва

Subpopulation composition of tumor-infiltrating lymphocytes in luminal breast cancer and its effect on effectiveness of neoadjuvant chemotherapy

E.I. Kovalenko, E.V. Artamonova, T.N. Zabotina, Z.G. Kadagidze, S.G. Bagrova, M.V. Kiselevsky, I.K. Vorotnikov, D.A. Denchik, V.I. Kuzmina, E.N. Zakharova, E.K. Shoua, M.V. Khoroshilov, A.V. Egorova, V.A. Haylenko

National Medical Research Centre of Oncology n. a. N. N. Blokhin, Russian National Research Medical University n. a. N. I. Pirogov; Moscow, Russia

Резюме

Опухоль (тумор)-инфильтрирующие лимфоциты (ТИЛ) играют ключевую роль в формировании противопухолевого иммунитета и, как показали исследования, могут являться одним из маркеров эффективности лечения и прогноза течения онкологического заболевания. Целью нашего исследования было изучение субпопуляционного состава лимфоидного инфильтрата при раннем люминальном раке молочной железы у пациентов, получавших неоадъювантную химиотерапию (НАХТ), и его влияние на достижение полного ответа на лечение. Материалы и методы. В исследование были включены 24 пациентки, получавшие антрациклин-таксансодержащую предоперационную химиотерапию. Субпопуляционный состав ТИЛ оценивался в образцах кор-биопсии до начала НАХТ у всех больных, после лечения оценка производилась на послеоперационном материале. Анализ осуществлялся методом проточной цитофлуориметрии. Проведена клинико-иммунологическая оценка по следующим семи субпопуляциям лимфоцитов: CD3⁺, CD3⁺CD4⁺, CD3⁺CD8⁺, CD4⁺CD127⁺CD25⁺, CD3^–CD19⁺, CD3^–CD16⁺CD56⁺, CD3⁺CD16⁺CD56⁺. Результаты. Частота полного патоморфоза составила 16,7%. Выявлено, что исходный уровень до лечения CD45⁺, CD3⁺, CD3⁺CD4⁺, CD8⁺, CD8⁺CD3⁺, CD19⁺, CD4⁺CD25⁺CD127⁺, CD3-CD16⁺CD56⁺, CD3⁺CD16⁺CD56⁺ – лимфоцитов не различался в зависимости от стадии заболевания (II или III), подтипа опухоли (люминальный А/В) и уровня Ki-67 (до 20, 20–39, 40 и более). Корреляций между Ki-67 и содержанием ТИЛ также не обнаружено. При проведении регрессионного анализа выявлено, что только уровень CD3⁺, CD3⁺CD8⁺ и CD19⁺ являлся значимым фактором достижения полной патоморфологической регрессии (р = 0,005). При выделении эмпирической узкой подгруппы, которая характеризовалась высоким содержанием (выше или равно медиане) CD3⁺, CD3⁺CD8⁺ и низким (ниже медианы) – CD19⁺ (четыре наблюдения) частота полного паморфоза достигла 75%. Вывод. Таким образом, исходное содержание в опухоли Т-лимфоцитов (CD3⁺, CD3⁺CD8⁺) и В-лимфоцитов (CD19⁺), не зависящее от стадии заболевания, подтипа опухоли, индекса пролиферативной активности, явилось предиктором высокой чувствительности к неоадъювантной химиотерапии и связанной с этим большей частотой полного патоморфоза.

Summary

Tumor-infiltrating lymphocytes (TILs) play a key role in the formation of anti-tumor immunity and, as studies have shown, can be one of the markers of treatment effectiveness and cancer prognosis. The aim was to study the subpopulation composition of the lymphoid infiltrate in early luminal breast cancer in patients receiving neoadjuvant chemotherapy (NACT) and its effect on achieving a pathological complete response (pCR). Materials and methods. We included 24 patients who received anthracycline-taxane-containing preoperative chemotherapy. The subpopulation composition of TIL was assessed in core-biopsy samples before starting NACT in all patients; after treatment, the assessment was made on postoperative material. The analysis was carried out by flow cytometry. Clinical and immunological assessment was carried out for the following seven subpopulations of lymphocytes: CD3⁺, CD3⁺CD4⁺, CD3⁺CD8⁺, CD4⁺CD127⁺CD25⁺, CD3^–CD19⁺, CD3^–CD16⁺CD56⁺, CD3⁺CD16⁺CD56⁺. Results. The incidence pCR was 16.7%. It was revealed that the initial level before treatment of CD3⁺, CD3⁺CD4⁺, CD3⁺CD8⁺, CD4⁺CD127⁺CD25⁺, CD3^–CD19⁺, CD3^–CD16⁺CD56⁺, CD3⁺CD16⁺CD56⁺ lymphocytes did not differ depending on the stage of the disease (II or III), tumor subtype (luminal A/B) and Ki-67 level (up to 20, 20–39, 40 and more). No correlations were found between Ki-67 and TIL content. When conducting regression analysis, it was revealed that only the level of CD3⁺, CD3⁺CD8⁺ and CD19⁺ was a significant factor in achieving a pCR (p = 0.005). When an empirical subgroup was identified, which was characterized by a high content (above or equal to the median) of CD3⁺, CD3⁺CD8⁺ and low (below the median) CD19⁺ (four observations), the frequency of pCR reached 75%. Conclusion. Thus, the initial level of T-lymphocytes (CD3⁺, CD3⁺CD8⁺) and B-lymphocytes (CD19⁺) in the tumor, regardless of the stage of the disease, tumor subtype, ki-67 index, was a predictor of high sensitivity to neoadjuvant chemotherapy of luminal breast cancer and was associated with higher frequency of pCR.

Иммунная система играет центральную роль в надзоре и контроле за злокачественными новообразованиями. В последние годы взаимоотношения между опухолью и инфильтрирующими ее клетками иммунной системы являются предметом активного изучения. Опухоль-инфильтрирующие лимфоциты (тумор-инфильтрирующие лимфоциты, ТИЛ) занимают ключевую позицию в концепции противоопухолевого иммунитета и могут являться одним из потенциальных биомаркеров прогноза течения онкологического заболевания и эффективности лечения. Субпопуляционный состав ТИЛ весьма разнообразен, что объясняет тот факт, что они могут не только подавлять рост опухоли, но и способствовать прогрессированию путем селекции иммунорезистентных клонов или посредством создания в микроокружении опухоли условий, способствующих ее росту [1]. Гетерогенная популяция ТИЛ включает в основном Т-лимфоциты и в меньшей степени В-лимфоциты и натуральные киллерные клетки (NK) [2]. С развитием иммуногистохимии исследуется все большее количество субпопуляций ТИЛ. Так, CD3 – биомаркер Т-лимфоцитов – экспрессируется почти на всех Т-лимфоцитах. В соответствии с поверхностными маркерами Т-лимфоциты в основном включают следующие подтипы: CD8⁺ – цитотоксические Т-лимфоциты, CD4⁺ – Т-хелперные лимфоциты, CD45RO⁺ – T-клетки памяти, регуляторные клетки FOXP3⁺ и т. д. CD8⁺ – цитотоксические Т-лимфоциты особенно известны своей цитолитической активностью в отношении раковых клеток. Напротив, CD4⁺ – T-хелперные клетки второго типа, включая FOXP3⁺ (регуляторные T-лимфоциты), подавляют противоопухолевый иммунный ответ, нарушая представление антигена, активность и цитотоксичность других иммунных клеток, тем самым способствуя росту опухоли и развитию иммунной толерантности [3]. Точная роль В-лимфоцитов и NK-клеток до сих пор четко не определена и противоречива [4, 5]. Клинические исследования продемонстрировали значительную связь между наличием определенных субпопуляций иммунных клеток и ответом на лечение у пациентов с различными солидными опухолями [6]. При раннем раке молочной железы (РМЖ) при HER2-положительном и тройном-негативном (ТН) подтипах иммунные инфильтраты обнаруживаются в 75% опухолей, причем до 20% опухолей имеют особенно плотный инфильтрат, меньшее количество ТИЛ определяется при люминальных подтипах [7]. В исследованиях было продемонстрировано, что уровень ТИЛ является прогностическим для ответа на неоадъювантную химиотерапию (НАХТ) при ТН и HER2-положительном раке молочной железы, но их роль при люминальном подтипе и влияние на прогноз менее ясны [8–12]. Так, по данным объединенного анализа, включившего данные 3 771 пациента, повышение уровня ТИЛ ассоциируется с повышением уровня полных патоморфологических регрессий после проведенной НАХТ при всех подтипах РМЖ. При ТН и HER2-положительном РМЖ высокий уровень ТИЛ был связан с увеличением выживаемости; при люминальных опухолях, напротив, являлся фактором неблагоприятного прогноза, что, возможно, связано с разным субпопуляционным составом лимфоидного инфильтрата [9]. Следует отметить, что ни в одном исследовании прицельно не проводился анализ зависимости эффективности НАХТ от уровня и композиции ТИЛ исключительно при люминальном подтипе РМЖ.

Целью исследования было изучение субпопуляционного состава лимфоидного инфильтрата при люминальном раке молочной железы у пациентов, получавших неоадъювантную химиотерапию (НАХТ), и его влияние на достижение полного ответа на лечение. Оценка проведена на материале кор-биопсии опухоли и на послеоперационном материале после проведенного лечения. Оценено количество иммунных клеток и их процентное содержание в ассоциированных с опухолью иммунных инфильтратах.

Далее читайте в журнале «Диагностика и онкотерапия» серии «Медицинский алфавит» https://medalfavit.ru/product/diagnostika-i-onkoterapija/